Page 35 - 59. КОНГРЕС СТУДЕНАТА БИОМЕДИЦИНСКИХ НАУКА СРБИЈЕ СА ИНТЕРНАЦИОНАЛНИМ УЧЕШЋЕМ

59. КОНГРЕС СТУДЕНАТА БИОМЕДИЦИНСКИХ НАУКА СРБИЈЕ 26-30.
СА ИНТЕРНАЦИОНАЛНИМ УЧЕШЋЕМ Април

ЦИТОФЛУОРИМЕТРИЈСКА ИСПИТИВАЊА ЕФЕКАТА НОВОСИНТЕТИСАНИХ КОМПЛЕКСА ПАЛАДИЈУМА НА НОРМАЛНЕ И
МАЛИГНЕ ЋЕЛИЈСКЕ ЛИНИЈЕ У КУЛТУРИ

Аутор: Марко Петровић, Ивана Божић
e-mail: markopetrovic152016@gmail.com
Ментор: доц. др Данијела Тодоровић
Катедра за Генетику, Факултет Медицинских наука, Универзитет у Крагујевцу, Србија

Увод: Комплекси паладијума су структурни аналози комплекса платине, имају сличне хемијске особине, али у односу на
5
њих показују око 10 пута већу реактивност, због чега се последњих година интензивно проучавају њихови антитуморски
ефекти.
Циљ рада: Циљ овог истраживања је био да се испита директно цитотоксично дејство новосинтетисаних комплекса
паладијума (Pd1 и Pd2) на хуманој ћелијској линији аденокарцинома грлића материце (HeLa) као и диференцијална
цитотоксичност у односу на нормалне ћелије хуманих фибробласта (MRC-5). Циљ је био да се утврди тип ћелијске смрти,
као и дистрибуција ћелија по фазама ћелијског циклуса након третмана.
Материјал и методе: Цитотоксично дејство новосинтетисаних комплекса паладијума је одређивано помоћу МТТ теста, 24h
и 48h након третмана различитим концентрацијама комплекса Pd1 и Pd2 (0,3, 1, 3, 10, 30 и 100μМ). Тип ћелијске смрти и
проценат апоптотичних ћелија је одређен методом проточне цитометрије бојењем ћелија помоћу AnnexinV-FITC/7-AAD.
Дистрибуција ћелија по фазама ћелијског циклуса одређена је методом проточне цитометрије, након бојења ћелија
пропидијум-јодидом.
Резултати: Анализирани паладијумски комплекси доводе до временски- и дозно-зависног повећења цитотоксичности
испитиване туморске ћелијске линије. Вредности IC50 за Pd1, одређене 24h и 48h након третмана, износе 57,5±12,4,
односно 13,7±13,4 за HeLa ћелије и 44,5±7,8, односно 32,9±6,0 за здраве ћелије фибробласта. Вредности IC50 за Pd2 су
вишеструко веће и износе 242,7±37,5, односно 82,9±3,7 за HeLa ћелије и 36,5±24,6, односно 183,0±48,0 за здраве ћелије
фибробласта. Методом проточне цитометрије је утврђено да 48-часовни третман комплексима у концентрацијама које
одговарају IC50 вредностима индукују апоптозу, док је проценат некротичних ћелија био занемарљив. Третман HeLa ћелија
испитиваним комплексом доводи до заустављања ћелијског циклуса у Ѕ фази.
Закључак: Добијени резултати показују да испитивани паладијумски комплекси доводе до смрти туморских ћелија
индукцијом апоптозе, док су цитотоксични ефекти на здравим ћелијама фибробласта ниски до умерени, што указује на
селективност у деловању на туморске ћелије и могућу примену у антитуморској терапији.
Кључне речи: апоптоза; ћелијски циклус; паладијум; канцер; култура ћелија

CYTOFLUORYMETRIC EXAMINATION OF THE EFFECTS OF NEWLY SYNTHESIZED PALLADIUM COMPLEXES ON NORMAL AND
MALIGNANT CELL LINES IN CULTURE

Author: Marko Petrović, Ivana Božić
e-mail: markopetrovic152016@gmail.com
Mentor: Assist. Prof. Danijela Todorović
Department of Genetics, Faculty of Medical Sciences, University of Kragujevac, Serbia

Introduction: Palladium complexes are structural analogues of platinum complexes with similar chemical characteristics and about
5
10 times higher reactivity. Their antitumor effects have been studied intensively in recent years.
The Aim: The aim of this study was to examine direct cytotoxic effects of the newly synthesized palladium complexеs (Pd1 and Pd2)
on human cervix adenocarcinoma cell line (HeLa) and its differential cytotoxicity on normal fibroblast (MRC-5). The aim was to
determine the type of cell death, as well as the cell cycle distribution after treatment.
Material and Methods: Cytotoxic effects were evaluated by MTT assay, 24h and 48h after treatment with different concentrations
of Pd complexes (0.3, 1, 3, 10, 30 and 100μM). The type of cell death and percentage of apoptotic cells were determined by flow
cytometry using Annexin-V-FITC/7-AAD-assay. The impact on cell cycle distribution was determined by flow cytometry, after
staining cells with propidium iodide.
Results: The examined palladium complexes induced cytotoxicity in time- and dose-dependent manner in analyzed tumor cell line.
The IC50 values for Pd1, calculated 24h and 48h after treatment, for HeLa cells were 57.5±12.4 and 13.7±13.4, respectively and for
healthy fibroblast 44.5±7.8 and 32.9±6.0. The IC50 values for Pd2 were 242.7±37.5 and 82.9±3.7 for HeLa cells and for healthy
fibroblast 36.5±24.6 and 183.0±48.0. Flow cytometric analysis showed that 48h treatment with concentrations corresponding to
IC50 values induced apoptotic cell death, while the percent of necrotic cells was negligible. Treatment with IC50 concentrations of
Pd1 and Pd2 promoted S cell cycle arrest in HeLa cells.
Conclusion: The obtained results show that the examined palladium complexes induced apoptotic cell death of tumor cells and the
S cell cycle arrest, while the cytotoxic effects on normal fibroblasts are low to moderate, which indicates on selectivity in the action
on tumor cells and possible application in antitumor therapy.
Keywords: apoptosis; cell cycle; palladium; cancer; cell culture

Kopaonik, 2018.
29