Page 213 - 59. КОНГРЕС СТУДЕНАТА БИОМЕДИЦИНСКИХ НАУКА СРБИЈЕ СА ИНТЕРНАЦИОНАЛНИМ УЧЕШЋЕМ

59. КОНГРЕС СТУДЕНАТА БИОМЕДИЦИНСКИХ НАУКА СРБИЈЕ 26-30.
СА ИНТЕРНАЦИОНАЛНИМ УЧЕШЋЕМ Април

ЕКСПРЕСИЈА И АКТИВНОСТ ЕНЗИМА АНТИОКСИДАТИВНЕ ЗАШТИТЕ У ЋЕЛИЈАМА ХУМАНОГ АДЕНОКАРЦИНОМА ДОЈКЕ
ТРЕТИРАНИМ ДОКСОРУБИЦИНОМ И УРСОДЕОКСИХОЛНОМ КИСЕЛИНОМ

Аутор: Настасија Милошевић, Марија Лучић
e-mail: nastasijamilosevic@gmail.com
Ментор: асист. др Бојан Станимиров, проф. др Кармен Станков
Катедра за биохемију, Медицински факултет Нови Сад, Универзитет у Новом Саду

Увод: Жучне киселине - амфифилни продукти катаболизма холестерола, поред улоге у дигестији и апсорпцији липофилних
ксенобиотика имају улогу сигналних молекула регулишући плејаду процеса у ћелији на молекуларном нивоу.
Доксорубицин је антрациклински цитостатик који испољава антитуморска својства првенствено на нивоу нуклеуса малигних
ћелија, али и на нивоу митохондрија повећањем продукције реактивних кисеоничних врста (ROS).
Циљ рада: In vitro испитивање специфичне активности ензима супероксид дисмутазе (SOD) и глутатион редуктазе (GR) као и
испитивање експресије гена за наведене ензиме у ћелијама хуманог аденокарцинома дојке третираних доксорубицином са
или без урсодеоксихолном киселином (UDCA).
Материјал и методе: Ћелије хуманог аденокарцинома дојке (MCF-7) су третиране доксорубицином са или без UDCA. Након
инкубације у трајању од 24 часа у ћелијама је одређена специфична активност SOD и GR. Након изолације РНК из MCF-7
ћелија и реверзне транскрипције помоћу комерцијалних сетова, релативна експресија SOD и GR гена је квантификована
применом qRT-PCR методе.
Резултати: Третман MCF-7 ћелијске линије доксорубицином као и котретман са UDCA је повећао специфичну активност SOD
и GR у односу на контролну групу ћелија. Међутим, повећање специфичне активности SOD и GR у обе експерименталне
групе није било статистички значајно у односу на контролну групу. Испитивањем генске експресије утврђено је да је
третман доксорубицином као и котретман са UDCA високо статистички значајно смањио експресију SOD у обе
експерименталне групе (p<0,001) у односу на контролну групу. Експресија GR у групи ћелија третираних доксорубицином
била је значајно смањена у односу на контролу (p=0,002) док је котретман са UDCA високо статистички значајно смањио
експресију GR (p<0,001).
Закључак: На основу резултата ове студије може се закључити да UDCA смањујући експресију параметара антиоксидативне
заштите на транскрипционом нивоу, испољава потенцијално хемосензитирајуће дејство на ефекте третмана малигних
ћелија доксорубицином.
Кључне речи: аденокарцином дојке; доксорубицин; урсодеоксихолна киселина; оксидативни стрес; глутатион

THE EXPRESSION AND ACTIVITY OF ANTIOXIDANT ENZYMES IN HUMAN BREAST ADENOCARCINOMA CELLS TREATED WITH
DOXORUBICIN AND URSODEOXYCHOLIC ACID

Author: Nastasija Milosevic, Marija Lucic
e-mail: nastasijamilosevic@gmail.com
Mentor: TA Bojan Stanimirov, Full Prof. Karmen Stankov
Department of Biochemistry, Faculty of Medicine Novi Sad, University of Novi Sad

Introduction: In addition to digestion and absorption of lipophilic xenobiotics, bile acids - the amphipathic steroid derivatives of
cholesterol catabolism are recognized as the signalling molecules, regulating numerous cellular processes. As an anthracycline
antineoplastic agent doxorubicin exerts antitumor effects primarily interacting with nucleus of malignant cell, but also at
mitochondrial level increasing the production of reactive oxygen species (ROS).
The Aim: In vitro evaluation of the specific activities of superoxide dismutase (SOD) and glutathione reductase (GR), as well as the
determination of gene expression for aforementioned antioxidative enzymes in human breast adenocarcinoma cells treated with
doxorubicin alone or in combination with ursodeoxycholic acid (UDCA).
Material and Methods: MCF-7 human breast adenocarcinoma cells were treated with doxorubicin alone or in combination with
UDCA. After incubation cells were collected and lysed, and specific activity of SOD and GR was determined. RNA isolation and cDNA
synthesis were performed using commercial kits, and relative quantitation of SOD and GR gene expression was determined by qRT-
PCR.
Results: Treatment of MCF-7 cell line with doxorubicin increased specific activity of SOD and GR compared to untreated cells. Co-
treatment with UDCA resulted in additional increase of specific activity of both enzymes compared to control as well as to
doxorubicin-treated cells. However, the increase in specific activity of enzymes in both experimental groups was not statistically
significant. Gene expression analysis revealed that treatment of cells with doxorubicin highly significant reduced expression of SOD
in both experimental groups (p<0.001) compared to control. The expression of GR was significantly decreased in doxorubicin-
treated cells (p=0.002) and highly significant reduced in UDCA-co-treated group of cells (p<0.001) compared to control.
Conclusion: The results of this study suggest that UDCA, by decreasing the expression of parameters of antioxidative defence on
transcriptional level, exerts potential chemo-sensitizing effects in malignant cells treated with doxorubicin.
Keywords: breast adenokarcinoma; doxorubicin; ursodeoxycholic acid; oxidative stress, glutathione

Kopaonik, 2018.
207