Page 1013 - 59. КОНГРЕС СТУДЕНАТА БИОМЕДИЦИНСКИХ НАУКА СРБИЈЕ СА ИНТЕРНАЦИОНАЛНИМ УЧЕШЋЕМ

59. КОНГРЕС СТУДЕНАТА БИОМЕДИЦИНСКИХ НАУКА СРБИЈЕ 26-30.
СА ИНТЕРНАЦИОНАЛНИМ УЧЕШЋЕМ Април

РОБУСНА ОПТИМИЗАЦИЈА HILIC-CAD МЕТОДЕ ЗА ОДРЕЂИВАЊЕ САДРЖАЈА НИТРАТА, ХЛОРИДА И СУЛФАТА КАО
НЕЧИСТОЋА У ЕКСЦИПИЈЕНСИМА

Аутор: Биљана Димитријевић
e-mail: bilja18dimitrijevic@gmail.com
Ментори: маг. фарм. Милена Рмандић, ванр. проф. Анђелија Маленовић
Катедра за аналитику лекова, Фармацеутски факултет Универзитета у Београду

Увод: У овом раду је описан развој HILIC-CAD методе за одређивање садржаја нитрата, хлорида и сулфата у ексципијенсима
применом Anytical Quality-by-Design (AQbD) приступа. Простор дизајна (DS) дефинисан је применом Монте Карло
симулацијe за пропагирања грешке која потиче од израчунатих коефицијената математичких модела. D-оптималним
дизајном испитан је утицај квалитативних и квантитативних хроматографских фактора на одговоре система, као и
параметара детектора на однос сигнал-шум испитиваних аналита.
Циљ рада: Развој селективне, робусне, поуздане и осетљиве методе која ће се користити за квантификацију нитрата,
хлорида и сулфата у ексципијенсима уз вероватноћу достизања дефинисаних критеријума =95%.
Материјал и методе: Раздвајање је вршено на ZIC-HILIC PEEK (100x4,6mm, 5µm) колони, а као мобилна фаза је коришћена
смеша ацетонитрила и воденог раствора амонијум-ацатата (АА), односно амонијум-формијата (AF). Испитивани фактори
варирани су према плану експримента дефинисаном у Design-Expert®програму применом D–оптималног дизајна: удео
ацетонитрила 70-80%, pH вредност 3-4,5, концентрација соли 100-150 mM и тип соли AA/AF, као и: температура евапорације
35˚C/50˚C , константа филтeра 0,1ѕ/5ѕ/10ѕ и притисака гаса 40-60 psi. Matlab® програм коришћен је за Монте Карло
симулације и конструисање DS-а.
Резултати: Квадратним математичким моделима успостављена је веза између експериментално добијених вредности
ретенционих фактора и испитиваних хроматографских услова, a 2FI моделима између односа S/N и испитиваних параметара
детектора. Утицај свих испитиваних фактора процењен је на основу коефицијената модела израчунатих за кодиране
вредности фактора и показано је да сви имају статистички значајан утицај.
Закључак: На основу добијених резултата дефинисан је DS за оба квалитативна фактора. Према облику и величини DS
добијеног са AF одабрани су следећи оптимални услови: 73% V/V ацетонитрила, 27% V/V водене фазе (pH вредност 4,25,
концентрација АF 125mM), притисак гаса 60 psi, температура 50˚C и филтер 10s. Добијена је добра усаглашеност моделом
предвиђених и експериментално добијених дефинисаних критеријума (α Na/Cl ≥1,2, α SO4/Mg ≥1,2, k Мg ≤10).
Кључне речи: D-оптимални дизајн; CAD; ексципијенси; неоргански јони

ROBUST OPTIMIZATION OF THE HILIC-CAD METHOD FOR CONTENT DETERMINING OF NITRATES, CHLORIDES AND SULPHATES AS
IMPURITIES IN EXCIPIENTS

Author: Biljana Dimitrijević
e-mail: bilja18dimitrijevic@gmail.com
Mentors: Assoc. Prof. Anđelija Malenović, TA Milena Rmandić
Department of Drug Analysis, Faculty of Pharmacy University of Belgrade

Introduction: This paper describes development of HILIC-CAD method for assay of nitrates, chlorides, sulphates in excipients by
Anytical Quality-by-Design (AQbD) approach. The DS is defined using Monte Carlo simulation to propagate the error originating
from calculated model coefficients. The D-optimal design examined the influence of qualitative and quantitative chromatographic
factors on system responses, as well as the influence of detector parameters on signal-noise ratio of investigated solutes.
The Aim: was development of selective, robust, reliable and sensitive method for quantification of nitrates, chlorides and sulphates
in excipients with probability of reaching defined criteria =95%.
Material and Methods: Separation was achieved on ZIC-HILIC PEEK (100x4.6mm, 5μm) column, and mixture of acetonitrile and
aqueous solution of ammonium-acetate (AA) or ammonium-formate (AF) was used as mobile phase. Examined factors were varied
according to experimental plan defined by D-optimal design in Design-Expert® software: acetonitrile content 70-80%, pH 3-4.5, salt
concentration 100-150mM, salt type-AA/AF, as well as evaporation temperature 35˚C/50˚C , filter constant 0,1ѕ/5ѕ/10ѕ and gas
pressure 40-60 psi. The Matlab® software was used for Monte Carlo simulations and DS construction.
Results: Quadratic mathematical models have established connection between experimentally obtained retention factor values
and examined chromatographic conditions, while 2FI models between S/N ratio and examined detector parameters. Examined
factors influence was evaluated based on model coefficients estimated for coded factor values and it was shown that all of them
have statistically significant effect.
Conclusion: Based on obtained results, DS was constructed for both qualitative factors. According to DS shape and size obtained
with AF, following conditions were selected as optimal: 73% V/V acetonitrile, 27% V/V aqueous phase, pH value 4.25, AF
concentration 125mM, gas pressure 60psi , temperature 50°C, filter 10s. Good compliance was obtained between predicted and
experimentally obtained defined criteria (α Na/Cl ≥1,2, α SO4/Mg ≥1,2, k Мg ≤10).
Keywords: D-optimal design; CAD; excipients; inorganic ions

Kopaonik, 2018.
1007