Page 196 - 59. КОНГРЕС СТУДЕНАТА БИОМЕДИЦИНСКИХ НАУКА СРБИЈЕ СА ИНТЕРНАЦИОНАЛНИМ УЧЕШЋЕМ

59th SERBIAN STUDENTS’ CONFERENCE OF BIOMEDICAL SCIENCES
April WITH INTERNATIONAL PARTICIPATION
26-30
ЕФЕКТИ ПОЈЕДИНАЧНЕ И КОМБИНОВАНЕ ПРИМЕНЕ МЕТОТРЕКСАТА И РАЛОКСИФЕНА НА ХУМАНИМ ЕНДОМЕТРИЈАЛНИМ
СТРОМАЛНИМ ЋЕЛИЈАМА

Аутор: Дуња Божић
e-mail: dunja.bozic93@gmail.com
Ментор: асист. др Петар Чановић, доц. др Ивана Николић
Катедра биохемије, Факултет медицинских наука Универзитета у Крагујевцу

Увод: Најчешћи узрок развоја ендометријалне хиперплазије је повишен ниво и продужено деловање полног хормона
естрогена са изостанком прогестеронског дејства локално. Бенигне хиперплазије ендометријума могу малигно алтерисати,
па је неопходно испитати дејство лекова из различитих група који би комбинованом применом резултовали јачим
антитуморским ефектом уз изостнак нежељених дејстава.
Циљ рада: Циљ истраживања било је испитивање цитотоксичног и апоптотичног дејства појединачне и комбиноване
примене најнижих цитотоксичних доза испитиваних лекова на (ThESC) третираним ћелијама у односу на нетретиране.
Материјал и методе: У истраживању коришћене су ThESC ћелије – хумане ендометријалне стромалне ћелије које су
култивисане у комплетном медијуму до достизања конфлуентности од 85%. Концентрације испитиваних супстанци
-9
-6
(појединачна и комбинована примена) за ралоксифен су износиле 10 М и 10 М за метотрексат. Цитотоксични ефекат
испитиваних супстанци одређиван је MTT тестом. Апоптотични ефекат испитиваних супстанци одређиван је методом
флуоросцентне микроскопије детерминацијом експресије и локализације Bax и Bcl-2 протеина у третираним и контролним
ћелијама.
Резултати: Резултати показују да је цитотоксични ефекат комбиноване примене супстанци (34,44%) током 24 часа увећан 3,5
пута у односу на појединачни цитотоксични ефекат метотрексата (9,3%), 7 пута у односу на ралоксифен (5,1%) и 16 пута
(2,1%) у односу на контролне ћелије. Комбинована примена супстанци смањује експресију антиапоптотичног Bcl-2 протеина
6 пута у односу на контролне ћелије, 3,8 пута у односу на ралоксифен и 2,6 пута у односу на метотрексат. Комбинована
примена супстанци повећава експресију проапоптотичног Bax протеина 28 пута у односу на контролне ћелије, 2,8 пута у
односу ралоксифен и 2 пута у односу на метотрексат.
Закључак: Комбинована примена ралоксифена и метотрексата у најнижим цитотоксичним дозама индукује статистички
значајно јачи апоптотични ефекат на ThESC ћелије у односу на њихову појединачну примену.
Кључне речи: ралоксифен; апоптоза; метотрексат; ендометријална хиперплазија

THE EFFECTS OF INDIVIDUAL AND COMBINED APPLICATION OF METHOTREXATE AND RALOXIFENE ON HUMAN ENDOMETRIAL
STROMAL CELLS

Author: Dunja Božić
e-mail: dunja.bozic93@gmail.com
Mentor: TA Petar Čanović, Assist. Prof. Ivana Nikolić
Department of Biochemistry, Faculty of Medical Sciences, University of Kragujevac

Inroduction: Endometrial hyperplasia development is caused by elevated level and prolonged effect of estrogen with the lack of
progesterone effect locally. Endometrial hyperplasia can progress towards malignanty, so it’s necessary to examine the effect of
drugs whose combined application would result in a stronger antitumor effect with the absence of undesirable effects.
The Aim: The aim of the research was to examinate both cytotoxic and apoptotic effects of individual and combined treatment
using the lowest cytotoxic doses of investigated drugs on (ThESC) cells compared to control.
Material and Methods: The study used ThESC cells - human endometrial stromal cells that were cultured in the complete DMEM
-9 -6
medium. Concentrations of the tested substances for raloxifene were 10 M and 10 M for methotrexate. The cytotoxic effect for
tested substances was determined by MTT assay. The apoptotic effect of investigated substances was evaluated using fluorescence
method, determining both expression and localization of Bax and Bcl-2 proteins in treated and control cells.
Results: Results show that cytotoxic effect of combined substance application (34.44%) during 24 hours was increased 3.5 times
compared to the individual cytotoxic effect of methotrexate (9.3%), 7 times compared to raloxifene (5.1%) and 16 times (2.1%)
compared to the control cells. Combined application of substances reduced the expression of Bcl-2 proteins 6 times compared to
control cells, 3.8 times compared to raloxifene and 2.6 times compared to methotrexate. Combined application of substances
increased the expression of Bax proteins 28 times compared to control cells, 2.8 times compared to raloxifene and 2 times
compared to methotrexate.
Conclusion: Combined application of raloxifene and methotrexate at the lowest cytotoxic doses induces statistically significantly
stronger apoptotic effect on ThESC cells compared to their individual application.
Keywords: raloxifene; apoptosis; methotrexate; endometrial hyperplasia

Kopaonik, 2018.
190