Page 107 - 59. КОНГРЕС СТУДЕНАТА БИОМЕДИЦИНСКИХ НАУКА СРБИЈЕ СА ИНТЕРНАЦИОНАЛНИМ УЧЕШЋЕМ

59. КОНГРЕС СТУДЕНАТА БИОМЕДИЦИНСКИХ НАУКА СРБИЈЕ 26-30.
СА ИНТЕРНАЦИОНАЛНИМ УЧЕШЋЕМ Април

ИМУНОЦИТОХЕМИЈСКА И ФОТОМИКРОГРАФСКА АНАЛИЗА C6 ГЛИОМСКИХ ЋЕЛИЈА ТРЕТИРАНИХ ТАКСОЛОМ

Аутор: Небојша Брезић, Теодор Васић
e-mail: nebojsabrezic@gmail.com
Ментор: доц. др Александар Мирчић
Институт за хистологију и ембриологију ''Александар Ђ. Костић'', Медицински факултет Универзитета у Београду

Увод: Микротубули играју важну улогу у бројним ћелијским процесима, укључујући улогу у раздвајању хроматида током
ћелијске деобе. Микротубуларни отрови, лекови који ометају функције микротубула, користе се у терапији многих
малигних тумора, мада прецизан механизам њиховог цитотоксичног дејства није у потпуности расветљен. Таксол,
антимикротубуларни агенс који стабилизује микротубуле, изазива појаву различитих облика ћелијске смрти у третираним
ћелијама.
Циљ рада: Овим истраживањем желели смо да опишемо морфолошке облике ћелијске смрти који настају деловањем
таксола на Ц6 ћелијске линије глиома применом трансмисионе електронске и конфокалне микроскопије.
Материјал и методе: Као експериментални модел глиома, у овом истраживању користили смо Ц6 ћелијске линије
астроцитома пацова које смо инкубирали 24-72 сата са 2 μM таксола. На полутанким исечцима бојеним толуидин плавим,
одређиван је проценат апоптотских, мултинуклеарних и ћелија блокираних у митози, који је потом изражен кроз индексе.
Ултратанки пресеци су контрастирани и анализирани помоћу трансмисионе електронске микроскопије. За анализу помоћу
конфокалне микроскопије, користили смо примарна антитела на α-тубулин, а за њихову визуелизацију флуоресцентно
обележена секундарна антитела (Alexa 488).
Резултати: Примена таксола код Ц6 ћелијских линија глиома индуковала је повећање митотског и мултинуклеарног
индекса. ТЕМ анализом установљена је апоптоза као облик ћелијске смрти, а на конфокалном микроскопу, поред више
једара, запажени су и јасно изражени снопови микротубула у третираним ћелијама.
Закључак: Примена таксола код Ц6 глиомских ћелија изазвала је апоптозу ограниченог броја ћелија, јер се апоптотски
индекс благо повећао после 24 сата инкубације са таксолом, да би после 72 сата дошло до опадања његове вредности.
Митотски индекс значајно се повећао после 24 сата инкубације са таксолом, да би после 72 сата његова вредност опала.
Мултинуклеарни индекс повећао се после 24 саа, а нарочито после 72 сата инкубације са таксолом, што говори у прилог
томе да Ц6 глиомске ћелије, блокиране у митози, независно од активирања апоптоског процеса напуштају блокаду и
аберантно завршавају митозу.
Кључне речи: микротубули; таксол; апоптоза; ћелијска смрт

IMMUNOCYTOCHEMICAL AND PHOTOMICROGRAPHIC STUDY OF C6 GLIOMA CELL LINES TREATED WITH TAXOL

Author: Nebojša Brezić, Teodor Vasić
e-mail: nebojsabrezic@gmail.com
Mentor: Assist. Prof. Aleksandar Mirčić
Institute of Histology and Embryology ’’Aleksandar Đ. Kostić’’, Faculty of Medicine University of Belgrade

Introduction: Microtubules play a crucial role in many cell functions, including chromosome separation during cell division. Spindle
poisons, drugs that perturb microtubule functions, are used for the treatment of many malignant tumors, although precise
mechanism of their cytotoxic activity is yet unknown. Taxol, an antimicrotubular agent which stabilizes the microtubules, gives rise
to different forms of cell death in treated cells.
The Aim: With this research, we wanted to describe morphological forms of cell death resulting by the use of taxol in the treatment
of C6 cell lines, using transmission electron and confocal microscopy.
Material and Methods: As an experimental model of glioma, we used rat astrocytoma C6 cell lines which we incubated for 24-72h
with 2 μM taxol. On semithin sections stained with toluidin-blue, we determined the percentage of apoptotic, multinuclear and
cells blocked in mitosis and expressed them as indexes. Ultrathin sections were contrasted and examined by transmission electron
microscopy. For the analysis with confocal microscopy, we used primary monoclonal antibodies on α-tubulin and fluorescently
labeled secondary antibodies (Alexa 488) for their visualization.
Results: Use of taxol in C6 cell lines resulted in increase both in mitotic and multinuclear index. TEM analysis revealed apoptosis as
a form of cell death and well defined bundles of microtubules, as well as multiple nuclei, were observed under confocal
microscope.
Conclusion: Use of taxol in C6 cell lines resulted in apoptosis of a limited number of cells, since the apoptotic index increased
slightly after 24h of incubation with taxol, only to decrease after 72h. Mitotic index increased significantly after 24h of incubation
with taxol, but its value decreased after 72h. Multinuclear index increased after 24h, but especially after 72h of incubation with
taxol, which suggests that C6 glioma cells, blocked in mitosis, independently on apoptosis activation leave the blockage and
aberrantly finish mitosis.
Keywords: microtubules; taxol; apoptosis; cell death

Kopaonik, 2018.
101