Page 81 - 59. КОНГРЕС СТУДЕНАТА БИОМЕДИЦИНСКИХ НАУКА СРБИЈЕ СА ИНТЕРНАЦИОНАЛНИМ УЧЕШЋЕМ

59. КОНГРЕС СТУДЕНАТА БИОМЕДИЦИНСКИХ НАУКА СРБИЈЕ 26-30.
СА ИНТЕРНАЦИОНАЛНИМ УЧЕШЋЕМ Април

ЦИТОХИСТОЛОШКЕ КАРАКТЕРИСТИКЕ ПАТОЛОШКИХ ПРОМЕНА ЗИДА КОЛОНА У ЕКСПЕРИМЕНТАЛНОМ МОДЕЛУ
КОЛИТИСА ИЗАЗВАНОГ ДЕКСТРАН-НАТРИЈУМ СУЛФАТОМ КОД C57BL/6 И BALBc МИШЕВА

Аутор: Анђела Ђокић
e-mail: adjokic1995@gmail.com
Ментор: доц. др Немања Јовичић
Катедра за хистологију и ембриологију, Факултет медицинских наука Универитета у Крагујевцу

Увод: Декстран-натријум сулфатом (DSS) индуковани колитис је модел који одговара улцерозном колитису код људи.У
циљу испитивања патохистолошких промена на слузници колона, индуковали смо колитис у C57BL/6 мишева (развијају
прогресивни УК) и BALBc мишева (код којих спонтано зараста слузница црева).
Циљ рада: Циљ је приступачним хистохемијским и имунохистохемијским методама бојења доказати и квантификовати
промене слузнице колона,фенотипске карактеристике инфилтришућих ћелија и степен фиброзе.
Материјал и методе: Кориштени 6-8 недеља стари мишеви C57BL/6 и BALB/c соја. Колитис је индукован давањем 3% DSS
током 5 дана, након чега је уследио седмодневни опоравак. Праћени су клинички параметри развоја болести. Колон је
изолован, испран и лонгитудинално исечен, а затим је пре фиксације формалином припремљен по “Swiss roll” техници.
Парафином укалупљени исечци (5 μm) су обојени Picrosirius red, HE и пентахромном техником за детекцију колагена и
мукополисахарида. Имунохистохемијском техником су испитивани CD3, CD4, CD68 и TLR4 маркери. Фотомикрографије су
анализиране помоћу програма ImageJ. Оштећење мукозе је квантификовано одговарајућим скор системом. За статистичку
анализу јекоришћен Mann-Whitney тест (SPSS v22).
Резултати: 12 дана од почетка индукције болести C57BL/6 мишеви су имали значајно израженије клиничке (р<0,01) и
патохистолошке(р<0,01) знакове болести. У колону C57BL/6 мишева уочена је потпуна деструкција епитела у дисталним
партијама, губитак крипти, изражен субмукозни едем и масивна инфилтрација ламине проприје и субмукозе. Уочено је и
смањење дужине колона код C57BL/6 мишева (р<0,05), праћено повећаним депозитима колагена у епителу и субмукози
(р<0,05). Број пехарастих ћелија у епителу C57BL/6 мишева је био значајно мањи (р<0,05). Уочен је и значајно већи број
CD3+, CD4+ лимфоцита и CD68+ макрофага, праћен појачаном експресијом TLR4 на епителним ћелијама (р<0,05).
Закључак: Експериментални колитис изазван DSS-ом је јаче изражен код C57BL/6 мишева. Примена хистохемијских техника
и селективних бојења колагена и муцина значајно доприносе верификацији патолошких промена зида колона и
комплементарне су клиничким знацима болести.
Кључне речи: колитис; хистохемија; имунохистохемија; ImageJ

HISTOPATHOLOGICAL FEATURES OF THE COLONIC WALL IN DEXTRAN-SODIUM SULPHATE (DSS)-INDUCED COLITIS IN C57BL/6
AND BALBc MICE

Author: AndjelaDjokic
e-mail: adjokic1995@gmail.com
Mentor: Аsst. prof. Nemanja Jovicic
Department of Histology and embryology, Faculty of Medical Sciences, University of Kragujevac

Introduction: Because of the great similarities with human colitis, dextran-sodium-sulphate (DSS)-induced colitis has been the
mostused model. The acute disease progresses to severe colitisin C57BL/6 mice, while in BALB/c mice it's self-limited and starts to
resolve immediately after DSS removal.
The Aim: The aim was evaluation of histopathological features of the colonic wall, phenotype of colon infiltrating cells and fibrosis
using staining techniques.
Material and Methods: 6-8-week-old male C57BL/6 and BALB/c mice were used. DSS (3%) was given to mice instead of normal
drinking water for 5 days, with recovery period of 7 days. Clinical signs of colitis were evaluated. Colons were removed, rinsed and
cut longitudinally before being rolled into “Swiss roll”. Paraffin-embedded, 5μm thick sections were stained using Picrosirius red, HE
and pentachrome staining method that selectively stains collagen and mucopolysaccharides. Immunohistochemistry was used for
detection of CD3, CD4, CD68 andTLR4 positive cells. Fotomicrographs were made and analyzed using ImageJ software. Appropriate
disease score was used for pathohistological evaluation. SPSS v22(Mann-Whitney)was used forstatistical analysis.
Results: Severe colitis noticed in DSS-treated C57BL/6 mice with clinical (р<0,01) and histopathological signs (р<0,01). Destruction
of the entire epithelium, decreased number of goblet cells and loss of crypts, severe submucosal edema and massive infiltration of
inflammatory cells in the lamina propria and submucosa were noticed in C57BL/6 DSS-treated mice. Colon shortening was also
observed (р<0,05), accompanied with greater collagen deposition in epithelia and submucosa (р<0,05). Number of goblet cells
significantly lowered in colons of DSS-treated C57BL/6 mice. Number of infiltrating CD3+, CD4+ lymphocites and CD68+
macrophages increased significantly accompanied by increased TLR4 expression on epithelial cells (р<0,05).
Conclusion: Signs of disease in model of DSS-induced colitis were significantly more prominent in C57BL/6. Application of
histological tecniques and selective staining of collagen and mucins corresponds to clinical signs and contributes to verification of
disease.
Keywords: colitis; histochemistry; immunohistochemistry; ImageJ

Kopaonik, 2018.
75